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mirna——它很小,却发挥着重要作用

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浏览:- 发布日期:2016-12-12 13:42:49【 】

------随着人们对转录调控的不断研究,microrna 也逐渐成为了大家研究的热点。这篇文章我们就来简单了解一下如何研究这个小分子。

是一类内生的、长度约为20-24个核苷酸的小 rna,其在细胞内具有多种重要的调节作用。每个 mirna 可以有多个靶基因,而几个 mirna 也可以调节同一个基因。这种复杂的调节网络既可以通过一个 mirna 来调控多个基因的表达,也可以通过几个 mirna 的组合来精细调控某个基因的表达。据推测,mirna 调节着人类三分之一的基因。

q-pcr 来分析水平

这是一种较为简单的研究 mirna 的方法。这种方法适用于已知的 mirna 或是有序列的 。而这种研究方法就涉及到了一个问题,那就是 mirna 如何逆转录。由于 mirna 的长度在20-24,且其也没有 mrna 的 polya。所以 的逆转录也就和常规的 mrna 的逆转录有所区别。现在较为常见的 逆转录的方法主要是通过对 mirna 进行加尾的方法实现的。利用 poly(a)聚合酶多腺苷酰化成熟 mirna,并利用逆转录酶及 oligo-dt 引物扩增将其转变为 cdna(如图1)。这样一来我们就能利用引入的通用序列当作 q-pcr 的一端引物,而另一端的引物则利用 mirna 本身序列,这样就能对mirna进行定量分析了。

利用研究未知的秘密

由于现在被公布的 mirna 序列有限,导致定量的方法有时候未必行得通。但是随着技术的发展,mirna 的测序也应运而生。现在市面上较为成熟的 mirna 建库方案主要也是通过双端加上接头的方式,之后利用接头逆转录。但是这也会遇到一个问题,如何富集 mirna 的建库产物,因为建库起始是对总 rna 进行建库,所以建库后的产物中也含有其它的 rna。这时候就要利用到 mirna 的特点----短。因为 mirna 长度在20-24,再加上接头以及 index 后其长度会在 150bp 左右,之后通过跑 page 胶切下这一大小的片段,回收后送测序(如图2)。

这里仅仅简单介绍了  的两个较为常见的研究方法,如需了解更加详细的内容,欢迎关注欧易生物

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