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外泌体研究
外泌体(exosomes)是一种能被机体内大多数细胞分泌的直径大约为 30 - 150 nm 的具有脂质双层膜的微小膜泡。它广泛存在并分布于各种体液中,携带和传递重要的信号分子,近来的研究表明,mirna 存在于体液中的外泌体内,进行远距离的信息传递,在细胞分化、生物发育及疾病发生与发展过程中具有相当大的作用。
目前对于外泌体的鉴定主要有四种方法:透射电子显微镜(tem)、nanosight、westernblot、流式细胞术。
欧易特色
项目经验丰富
数千例样品实操经验积累,不断优化流程
全流程服务
提供从外泌体分离、微量抽提、文库构建、测序到生物信息学分析整套服务
全程质控
提供外泌体透射电镜检测、bca 蛋白定量、agilent 2100 rna 质检及测序文库定性定量质检,
有效规避实验风险,保证项目成功率
外泌体—small rna 研究技术(欧易提供)
●  agilent 芯片      ●  affymetrix 芯片     ●  small rna 测序     ●  pcr-array
案例展示
通过二代测序技术发现 mir-21 在肿瘤相关脂肪细胞和成纤维细胞的 exosome 中的表达量明显高于卵巢癌细胞。肿瘤相关的脂肪细胞和成纤维细胞中的 mir-21 可以转移到卵巢癌细胞中,mir-21 通过靶基因 apaf1 来抑制卵巢癌细胞的凋亡并产生化疗抗性。此外,转移性卵巢癌细胞可通过相邻基质细胞的外泌体递送 mir-21 来获得(图 1)。

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图 1 | mir-21 在肿瘤相关的脂肪细胞分泌的外泌体上调表达
参考文献
au yeung cl, co nn, tsuruga t, et al. exosomal transfer of stroma-derived mir21 confers paclitaxel resistance in ovarian cancer cells through targeting apaf1. nat commun 2016; 7:11150. (if: 12.353)
常见问题
1.哪些样品类型适合开展外泌体 small rna 测序?
答:外泌体主要存在于体液中,根据体液类型不同,其外泌体含量有较大差别,一般在血清/血浆中含量相对较高,而细胞培养上清、尿液、唾液等中外泌体含量偏低,因此建议优先选择血清/血浆样品进行相应实验(细胞培养上清需要提供 50 ml 以上)。
2.外泌体的分离采用哪一种技术更好?
答:由于样本性质和来源不一,目前仍没有一种方法能兼顾外泌体得率、纯度及生物活性。目前外泌体分离技术大致分为两类:超速离心、提取试剂盒。
超速离心:是囊泡分离的“金标准”,外泌体得率较高;但对实验仪器要求特殊,耗时较长,无法实现高通量。
提取试剂盒:基于外泌体表达的特异性表面抗原,利用相应的抗体通过免疫亲和分离,无须超速离心,耗时较短,可实现高通量;但相比超速离心,外泌体得率较低。
目前欧易生物分离外泌体采用的是 qiagen exoeasy kit。
3.能否进行外泌体中 mrna 或 lncrna 的检测?
答:除 small rna 外,也可以对外泌体中其他 rna 进行检测。但外泌体中的 mrna、lncrna 等大分子量 rna,含量较低、数量较少,并且稳定性比 small rna 差,容易发生降解,检测的稳定性与重复性不如 small rna。
样品须知

链接:如何搞定外泌体样本



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