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酵母双杂文库案例:泛素分离蛋白的酵母双杂交系统研究bap31与ptplb的互作-欧易生物

泛素分离蛋白的酵母双杂交系统研究bap31与ptplb的互作

传统的酵母双杂文库技术发现了很多细胞通路中可溶性蛋白的相互作用,而由于技术手段的局限膜蛋白的研究相对较少。基于泛素分离蛋白系统的酵母双杂交系统可解决这一问题,但到目前为止,这个系统还局限于研究已知的膜蛋白相互作用。本文构建了基于泛素分离蛋白的cdna文库并且提供了进行该实验的细节,从而筛选诱饵蛋白bap31的结合蛋白。bap31是内质网膜蛋白,可作为分子伴侣(或运输受体)和凋亡调节因子。文中研究了一种新型的来源于酪氨酸磷酸酶样b(ptplb)家族的蛋白,这种膜蛋白有四个α螺旋跨膜结构,可与bap31发生互作,可通过蛋白酶系统迅速降解。通过比较bap31敲除型和人bap31表达型的鼠细胞表明bap31对于ptplb稳定是必需的,与起初认为的bap31蛋白在内质网的功能一致。


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